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人白介素ELISA试剂盒的基本原理以及样本处理及要求
点击次数:569 发布时间:2018-04-17
   人白介素ELISA试剂盒的基本原理是:
  ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
  ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
  加入酶反应的底物后, 底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
  人白介素ELISA试剂盒样本处理及要求:
  1、血清:室温血液自然凝固 10-20分钟,离心 20分钟左右(2000-3000转 /分)。仔细收集上清, 保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  2、血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左 右(2000-3000转 /分) 。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  3、尿液:用无菌管收集,离心 20分钟左右(2000-3000转 /分) 。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  4、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转 /分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100万 /ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转 /分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  5、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS , PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS (PH7.4) ,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转 /分) 。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  6、标本采集后尽早进行提取, 提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃保存,但应避免反复冻融。
  7、人白介素ELISA试剂盒不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。

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